BCA Protein Assay 蛋白質定量

在幾種比色的蛋白質定量方法中,BCA 算是最廣泛的被使用在一般研究領域的方法,步驟簡單方便




BCA 為bicinchoninic acid的縮寫,通常用於檢測樣品內的Total protein,原理是藉由protein於鹼性溶液中會將二價的Cu離子還原為一價的銅離子,一價的銅離子又會與BCA形成可溶性的螯合物



這樣的螯合物可以於吸光562nm 呈現最大的吸收峰,以下是利用TECAN Infinite M200 進行吸光全波長掃描(Absorbance Scan)後得到的Spectrum



所以大部分的kit 都會建議在判讀儀的設定值上選用562nm 作為偵測波長

這次測試所用的條件如下

Reagent: (Pierce, Illinois): the kit contains BCA Reagent A, BCA Reagent B and BSAprotein standard (2 mg/ml)
Microplate: 96-well flat bottom transparent microplate (Greiner Bio-One, Germany)
Instrument: Infinite M200, quad4 monochromator™ detection system (Tecan Austria, Austria)

這時候也可以利用Infinite M200特有的Cuvette模組與Microplat模組同時比較,試劑混合的比例為

Microplate: 25 μl sample is mixed with 200 μl BCA working reagent;
Cuvette: 50 μl sample mixed with 1 ml BCA working reagent

經過37度incubation 30分鐘後測定

設定的parameter為


至於已經是TECAN的User看到上表應該很快就可以設定好程式了

至於Raw data就交給軟體麥哲倫 (Magellan)換算濃度就好囉