Modified Lowry Assay 蛋白質定量

Modified Lowry protein assay是依據Oliver Lowry於1951發表於期刊上的方法所改良

Lowry, O.H. et al.: Protein measurement with Folin Phenol Reagent. J. Biol. Chem., 193, 265-275, 1951

與原本方法的差異在於,在鹼性環境下的蛋白質與硫酸銅CuSO4 (cupric sulfate)以及tartate 形成更穩定的 tetradentate copper-protein complex

tetradentate copper-protein complex 會與Folin-Ciocalteu Reagent 形成藍色水溶性的產物,其最大吸收波長為750nm ,以下為利用 Infinite M200全波長掃描後的Spectrum



而其試劑的配置若是自行調配,步驟是比較繁瑣,須先配置四種溶液於使用前才混合,現在有很多廠商有提供相關的 kit,可以節省配置的時間

同樣也可利用Infinite M200特有的 Cuvette模組及Microplate模組做比較

條件如下
Microplate: 40 μl sample 混合於 200 μl Modified Lowry Reagent, shaking 30s ,incubated at room temperature for 10 minutes,add 20 μl Folin-Ciocalteu Reagentshaking 30s,incubated 30 minutes.

Cuvette: 200 μl sample 混合於1 ml Modified Lowry Reagent, incubated for 10 minutes before adding 100 μl Folin-Ciocalteu Reagent,mixed then incubated for 30 minutes.

另外由於加藥的速度也很關鍵,意思是第一個well與最後一個well會因加藥的時間差而影響呈色結果
所以不仿利用八爪或12爪pipettor來縮短加藥時間

若是TECAN Infinite reader 的user也可以藉選配的Injector 模組來達到即時加藥並偵測,這樣一來就不會有時間差影響讀值

而Measurement Parameter的設定如下表



讀取的Raw data就交給麥哲倫軟體 Magellan換算protein 濃度