PicoGreen dsDNA & RiboGreen RNA Quantification 微量核酸螢光定量

在實驗室中,一般常用的核酸定量方式不外乎利用 分光光度計(Spectrophotometer) 偵測A260 nm的吸光值來換算濃度,以A260/A280來換算純度,這種方法有幾個較為不方便的地方如:

1.檢體需稀釋至1ml的Cuvette中,稀釋倍數越大影響真實核酸濃度越大
2.因為稀釋使檢體更為稀薄,容易低於偵測極限
3.珍貴的檢體無法回收
4.偵測靈敏度為5ug/ml

針對第4項缺點,可以利用Fluorescense dye與dsDNA或RNA結合,來放大訊號提高偵測靈敏度的方法
例如 Hoechst bisbenzimide dye 33258 (2’-[4-Hydroxyphenyl]-5-[4-methyl-1-piperazinyl]-2,5’-bi-1H-benzimidazole trihydrochloride pentahydrate)

可以將靈敏度提高至10ng/ml

但如果需要像合成cDNA libraries, Reverse transcription PCRs, Differential display PCR以及某些藥理實驗需要更微量核酸檢體作為實驗時
Quant-iT PicoGreen dsDNA, RiboGreen RNA reagent可以提供高達偵測靈敏度高達 1ng/ml

以下分別為偵測線性及靈敏度所作的實驗
材料如下


設定值如下


待測的dsDNA 以及RNA 檢體的序列稀釋如下



換算出來的結果無論在線性關係及偵測極限都有不錯的表現






下次如果實驗有這樣的需求,不仿用這樣的條件來試試看喔