波長準確度在核酸定量方法的重要性

波長準確度在核酸定量方法的重要性

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名牌及3 C產品大家多少都有看過所謂的相似產品，
前陣子公司的TECAN小姐竟然也在某Reader競爭廠牌網站看到極為相似 TECAN Infinite NanoQuant 微量定量模組 　
大家還記得Infinite NanoQuant嗎? TECAN專利設計全球第一台可整合於多功能微盤分析儀的微量定量模組，內鑲16個石英材質的小孔徑，可同時精密定量16個2 μl 微量核酸或是蛋白質樣品，甚至是可支援標定螢光樣品的定量。




看到競爭廠牌推出相似版的微量定量模組，其實TECAN是暗自竊喜的，因為TECAN這項專利也大大證實，整合多功能微盤分析儀的微量定量模組是一個非常成功的商品，只需2μl體積即可同時定量16個核酸樣品，提供使用者更便利快速的方法進行DNA定量。



然而，相似產品多少都有正版所無法超越的規格限制 ，微孔盤分析儀專家TECAN在設計Infinite NanoQuant時，考量到進行DNA定量的時候，波長精確度對於微量核酸定量來說是一項非常重要的規格；大家都知道，核酸樣品之所以要同時判讀260以及280波長，是因為要計算DNA純度(DNA 260/280 Ratio)，DNA純度對於實驗重要性，可由核酸樣品的全波長掃描曲線看出。

這是一般溶於二次水中的DNA樣品於全波長掃描下的吸收曲線

DNA於偵測A260區間是屬與較平均的鐘型波峰，而於A280區間則是比較陡峭的曲線

容許誤差較大的機型可能偵測到其他不必要波長下的吸光值

這在A260的吸光值或許因中型分布而影響不大

但是在A280陡峭的吸光曲線下則會得到很大的誤差


加上計算純度公式A280為分母，所以誤差大的分母會使得純度值誤差被放的更大






簡單來說 在以O.D A260/A280 偵測核酸檢體技術上

波長精確度越小，可以得到越準確的值，避免其他波長所造成的不穩定誤差

而如果機器波長精確度較差的話，加上DNA判讀後所得到的OD數值其實都不高，所以一些些的波長偏差，對於後續的DNA純度計算一定都會造成放大的錯誤數值。

TECAN Infinite 系列儀器，波長精確度規格為如下

小於 315 nm波長範圍，波長精確度為± 0.3 nm (就是指DNA的260/280判讀波長囉)

大於315 nm，波長精確度為0.5 nm；

相較於其他市售全波長機種當中，波長精確度多為2 nm



另外在跟大家說明一下，TECAN在DNA定量，260/280 Ratio精確度規格趨近於±0.07，如此優異的光學設計，我想TECAN應該是相當有自信不怕任何仿效產品的。




<部分內容來自Tecan小姐的部落格>