吸光螢光雙模式偵測 -- 在微生物監控的運用

吸光螢光雙模式偵測 -- 在微生物監控的運用

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一般在利用大腸桿菌或是酵母菌表現我們要的重組蛋白之前
都會先觀察轉殖進去的基因對細胞的影響
例如像表現的蛋白具有細胞毒性
就會減緩其生長週期
所以觀察轉殖後的大腸桿菌(E.coloi)或是酵母菌(Yeast)的生長週期是在確定蛋白質表現量前會先觀察的項目
傳統的作法是將接種在培養基(medium, broth ) 的大腸桿菌或是酵母菌養在控溫的培養箱中
每隔半小時或一小時 在無菌操作台上取出一部分的培養基在1 mL 的Cuvette中以分光光度計(Spectrophotometer) 測量其吸光O.D值這樣的實驗通常需要持續 8~24小時不等
在每1小時的間隔時間當中除了不容易分身去安排其他實驗還必須擔心樣品取出incubator所造成的溫差影響還有在無菌操作台可能造成的汙染最後還可能需要人員 overnight進行
阿暉以前在實驗室就有這樣的經驗
其實實驗並不用這麼辛苦有使用Infinite 的朋友有福啦
Infinite 內建的溫控及震盪功能可以將細胞維持在控制溫度下並且依據細胞的特性做震幅的微調就像在incubator的環境下一樣
而且可以一次做96 well
也就是說可以在相同的環境條件下觀察 96種不同的變因所造成的影響來相對比較
Infinite Magellan 軟體還可以將不同樣品的生長曲線圖重疊起來
這樣就更一目了然啦
除此之外在國內外許多研究單位包括中研院榮獲Cell期刊殊榮的呂俊毅老師實驗室更使用吸光螢光雙模式偵測
簡單來說 就是將具有GFP基因轉殖的 E.coli 或 yeast 在 Infinite 的溫控震盪模式下分別以吸光 600 nm 觀察 O.D值觀察生長曲線
另外利用螢光 485 nm激發 GFP
觀察 535nm散射光訊號得知GFP被表現的時間點
比照吸光跟螢光值可推知生長曲線與表現蛋白的對應關係

如圖 藍色的線表示吸收光 600nm的 O.D值
綠色的線表示GFP被大量表現的趨勢
哇....真方便 (迷之音)
真不知道拯救的多少研究生overnight 睡不飽

衍伸閱讀

為何不同種交配無法繁殖？中研院解密 (呂老師實驗室也是 Infinite 的愛用者喔) 另外擷取一段期刊上對這應用的介紹