時差性螢光 TRF (Time Resolved Fluorescence) 用來避免自體螢光影響的技術

時差性螢光 TRF (Time Resolved Fluorescence) 用來避免自體螢光影響的技術

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TRF 是利用鑭系元素的螯合物(Lanthanid Chelates)標示在欲分析的分子如DNA、Protein 上
其螯合物的結構簡圖如下：

與一般的有機螢光的比較表如下：
TRF 的特點：
Large Strokes Shift：
激發與發射光譜不會相互干擾，沒有自發的淬滅(Internal quenching)現象，因此得到最多的可用訊號，靈敏度增加。
Long Emission Time：
Eu-chelate 的發射光(Emission)能持續數百個微秒(microsecond)；一般的螢光只能維持數個奈秒(nanosecond)。因此可利用適當的機器偵測自激發光(Excitation)後的400-800 微秒的螢光訊號，藉此排除背景的螢光雜訊。
High Sensitivity：
因為背景降低且沒有自發的淬滅(Internal quenching)現象，相對地提高S/N 比值，所以TRF 的靈敏度比一般的螢光來得高。
其應用的範圍包括
Immunoassays
Kinase assays
Receptor-ligand binding assays
GPCR function assays: ex. cAMP, GTP binding
DNA hybridization
Cytokine assay
Biodistribution
Molecular interaction
Enzyme assays

以上圖文轉載自 Blossom 產品文宣 (實在整理的很完整)
有這方面實驗試劑需求的不彷也可以參考看看他們所代理的產品

以下影片可以更清楚的了解儀器是如何區別長效染劑螢光以及自體螢光


藍色曲線表示自體螢光,自體螢光可能來自於96孔盤的材質 細胞的蛋白 或是植物體的代謝物質
這些自體螢光的發光半衰期短

紅色曲線表示長效型螢光的發光半衰期

儀器避開偵測T0-T1 週期間的自體螢光 ,(這段時間稱為 lag time)
而只接收 T1-T2 週期間的螢光 ,(這段時間稱為 integration time)
(lag time及 integration time 會在以後的 TR-FRET及HTRF 中常提到)

這樣就可以精確的得到待測物的訊號而避免自體螢光的干擾囉