用螢光觀察 Cell Migration 的有趣工具

用螢光觀察 Cell Migration 的有趣工具


http://tw.myblog.yahoo.com/platereader-platereader/article?mid=68&prev=81&next=62&l=a&fid=7

腫瘤細胞具有不正常增生或是特殊移行作用(migration)的特性

在研究抗癌新藥或是抑制腫瘤增生的實驗方法中
有一種 cell migration assay 就是利用觀察藥物是否能抑制移行作用來判斷藥物是否有效
聽過的 兩種實驗的作法是分別在culture plate及 membrane上用棒子畫出井字號的區塊
將要測試的藥物加在井字號的中央區塊
再將腫瘤細胞株 seeding在周圍的區塊 (以上的順序會因為在membrane或是在 dish上順序不同)
在顯微鏡底下觀察 Cell migrate到井字號中間區塊的程度
若是cell 都不受藥物抑制 則細胞則會蔓延到中間區塊
若是藥物具有抑制腫瘤細胞的功能 則會延緩細胞蔓延到中央區塊的速度
以這樣的方法 大部分都只能在守在顯微鏡前 在定點的時間連續觀察
並且用計數器來算細胞的數量
有時候這樣的實驗必須持續觀察幾十個小時
那overnight就在所難免了

今天看到一家 platyups公司有趣的 kit (Oris migration assay)
為什麼說有趣呢 因為原理雖然簡單道具也很淺顯易懂
但是從沒想過可以這樣用
圖中的黑色圓柱狀是96孔盤的其中一個well的剖面圖
藍色的部份也是一個圓柱狀的stopper 剛好可以塞在well裡
並且在最底部的地方可以把microplate底的中心遮住一個圓圈圈的面積
讓cell seeding後 可以不貼附在中心的圓圈圈
然後加藥並且加螢光染劑染細胞
在想觀察migration現象的時候再把中間藍色stopper 拿起來
讓癌細胞自行發生migration現象

再來就可以藉由觀察螢光知道migration的程度囉
在螢光顯微鏡底下看起來的就像這樣


利用螢光觀察的好處就是比在相差式顯微鏡下可以更容易的觀察到
另外呢 如果是希望連續的觀察 migration的程度的話
也可以不用幾十個小時守在顯微鏡旁連續觀察囉
你也可以用盤式螢光分析儀 (像 TECAN Infinite 系列都可以喔)
在溫控的條件下 持續作kinetic的螢光判讀
就是說 你可以自行選擇每間隔多久時間就讀一次
(像每15分鐘讀一次,連續讀20小時就可以得到 80 個螢光值 並可以看出他的曲線及趨勢)
比在螢光顯微鏡看到還更能夠以數據化來表示程度喔
Infinite 可以針對貼附型細胞集中在microplate 底部 而由下方來偵測螢光訊號
另外在96孔盤的 單一個well 裡還可以細分成不同區塊進行判讀並得到獨立資料
(96 孔盤單一well可再細分成81 個區塊 )
就可以更明確區分中心區塊與周圍區塊的消長
以下附上原廠的影片超連結
有介紹如何使用這有趣的工具喔
http://www.platypustech.com/discoverassemblykit.html

# 本文介紹 Oris Cell migration assay 圖片轉載自 Platyups網站