Reporter Gene Assay 觀察細胞內基因調控的方便技術

Reporter Gene Assay 觀察細胞內基因調控的方便技術

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細胞像是一座複雜的工廠
細胞為了維持存活,生長,受傷,修復等等狀況
必須一直不斷著進行著調控蛋白質生合成或酵素作用的機制
近來 為了更深入探討機制的來龍去脈 發展了許多Reporter gene assay 技術來觀察有興趣的基因及其蛋白表現

常見的方法是利用基因轉殖的方式 將會作用呈色物質或是能發光的蛋白送至細胞內表現
而根據reporter gene 呈現的方式不同 可分為吸光, 螢光, 冷光三大類

吸收光
大部分是利用酵素作用將 substrate呈色, 觀察顏色濃淡變化, 例如
β-Galactosidase (β-gal) 類似藍白篩將substrate 切掉一塊而呈色
β-glucuronidase (GUS) 常用於表現在植物體,

螢光
表現出螢光蛋白 ,藉由光線激發後所散射的螢光觀察, 例如
最常見的 Green fluorescent proteins(GFP) 已經大量用於在Eukayotic cell, E.coli, yeast甚至是動植物體內, 像是紅極一時的螢光斑馬魚, 螢光老鼠等等
甚至開發出許多波長不同或螢光強度更顯著的YFP, EGFP, EYFP, ECFP, DsRed
另外還有廠商以各式熱帶水果來命名 像mCherry, mOrange, mStrawberry ..等等"口味"

冷光
冷光則是表現可作用基質的酵素,藉由酵素作用基質後產生的光來觀察, 像是
Secreted alkaline phosphatase(SEAP)
Luciferase(Luc)
Dual-Luciferase Reporter (DLR)

而以上這幾種Reporter 則端看實驗設計囉 , 舉例來說
Report gene表現強, 細胞又不會因為substrate的毒性影響 就可以用β-Galactosidase (β-gal)
如果reporter gene反應複雜且微弱, 而且GFP的molecular size又不會造成立體空間障礙,可以用fusion GFP以螢光觀察
如果細胞體內有自體螢光, 或是reporter gene 微弱, 就可以試試冷光囉

如果對於這方面實驗有興趣的話歡迎留言喔
衍伸閱讀 雙色冷光 Dual Luciferase reporter assay